date:2021-12-22 13:04:13
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。為了研究細(xì)胞遷移的機(jī)制，科學(xué)家們傳統(tǒng)上轉(zhuǎn)向“劃痕試驗(yàn)”，它利用移液器尖端在多孔板中的單層細(xì)胞上“劃痕”，并觀察間隙所需閉合的時(shí)間（這些有時(shí)也被稱為“傷口閉合”或“傷口愈合”分析）。這種類型的實(shí)驗(yàn)允許分析細(xì)胞遷移，并可以用各種藥物和化學(xué)品來增強(qiáng)，以闡明特定的機(jī)制。
在 ibidi 35mm µ-Dish 中培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，預(yù)置2-Well Culture-Insert。移除插件后，讓細(xì)胞遷移 24 小時(shí)，然后固定在 4% PFA 中，并進(jìn)行透化。VE-鈣粘蛋白（洋紅色）、 F-肌動(dòng)蛋白用鬼筆環(huán)肽（綠色）和細(xì)胞核用DAPI（藍(lán)色）的抗體染色，然后進(jìn)行共聚焦成像。
Derek Sung, University of Pennsylvania School of Medicine：
我一直都有進(jìn)行劃痕分析。與大多數(shù)體外測定類似，一致性是獲得準(zhǔn)確和可重復(fù)結(jié)果的關(guān)鍵。作為進(jìn)行過無數(shù)次此實(shí)驗(yàn)的人，使用移液器手動(dòng)創(chuàng)建間隙存在一些過去給我?guī)砺闊┑年P(guān)鍵問題。這就是為什么發(fā)現(xiàn) ibidi Culture-Inserts是一種救星。ibidi 細(xì)胞培養(yǎng)插件與傳統(tǒng)的劃痕檢測方法相比具有許多優(yōu)勢：
1. 標(biāo)準(zhǔn)的間隙距離
傳統(tǒng)劃痕分析和使用移液管手動(dòng)劃痕大挑戰(zhàn)之一是間隙距離不一致。而且，劃痕往往劃不直。因此，起始距離通常會(huì)在幾十到幾百微米之間變化。ibidi 的細(xì)胞培養(yǎng)插件中心會(huì)產(chǎn)生500 µm 無細(xì)胞的人造間隙。這確保了間隙是直的，并且每次的距離都是一致的。
2. 干凈的遷移邊緣
手動(dòng)劃痕還會(huì)產(chǎn)生未完全去除的自由浮動(dòng)細(xì)胞的問題。這些自由漂浮的細(xì)胞可以通過延遲自由邊緣的遷移、釋放細(xì)胞內(nèi)內(nèi)容物或重新附著來影響遷移率。ibidi 的細(xì)胞培養(yǎng)插件是可移除的，留下干凈筆直的邊緣。
3. zuei小化細(xì)胞數(shù)
傳統(tǒng)的劃痕檢測是在多孔板中完成的，需要一層匯合的細(xì)胞。如果實(shí)驗(yàn)有多種條件（藥物治療或基因操作）并且需要多次重復(fù)，這會(huì)需要增加大量細(xì)胞。對(duì)于珍貴或昂貴的細(xì)胞（例如從難以獲得的組織中分離出的原代細(xì)胞），這些實(shí)驗(yàn)可能變得難以進(jìn)行。ibidi 的細(xì)胞培養(yǎng)插件具有較小的生長面積，可大限度地減少實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞數(shù)量（準(zhǔn)確地說，每孔0.22 cm 2）。這允許大限度地利用寶貴的細(xì)胞或增加重復(fù)次數(shù)。
4. 蓋玻片底皿
劃痕分析通常在多孔板中進(jìn)行，底部厚，聚苯乙烯，只允許明場成像和間隙距離的量化。ibidi 的細(xì)胞培養(yǎng)插件具有經(jīng)過組織培養(yǎng)處理和滅菌的蓋玻片底部。這允許進(jìn)行明場和免疫熒光成像。就我個(gè)人而言，我認(rèn)為這是該產(chǎn)品好的方面，讓我們能夠看到如細(xì)胞骨架、細(xì)胞粘附形態(tài)、核形態(tài)等結(jié)構(gòu)。此外，多模態(tài)成像功能大限度地提高了單個(gè)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)量，從而節(jié)省了成本和試劑。
5. 單個(gè)實(shí)驗(yàn)的獨(dú)立插件
“邊緣效應(yīng)”是指一種細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)象，其中多孔板外周的孔比內(nèi)孔經(jīng)歷更多的蒸發(fā)，導(dǎo)致不同的條件和潛在的不一致結(jié)果。使用多孔板進(jìn)行劃痕檢測時(shí)可以看到類似的效果，影響結(jié)果的一致性和重現(xiàn)性。ibidi 的細(xì)胞培養(yǎng)插件單獨(dú)包裝，用于單次實(shí)驗(yàn)。這可以防止任何“邊緣效應(yīng)”并確保數(shù)據(jù)一致。另外，培養(yǎng)皿設(shè)計(jì)有蓋子鎖定功能，以確保在處理盤子時(shí)蓋子保持打開狀態(tài)。
與槍頭劃痕檢測相比，ibidi 傷口愈合插件可提供更高的重現(xiàn)性
由于細(xì)胞遷移開放區(qū)域隨時(shí)間發(fā)生變化。使用 ibidi Culture-Insert 2 孔（左）和用移液器吸頭刮擦產(chǎn)生間隙的對(duì)比。數(shù)據(jù)來源：德國弗萊堡大學(xué)的 M. Börries。
傷口愈合插件
VS
槍頭劃痕
乍一看，槍刮和放置插件的方法似乎是兩種非常相似的創(chuàng)建無細(xì)胞間隙的方法。 然而，仔細(xì)觀察，這兩種方法可能在重要檢測結(jié)果方面的影響有所不同：
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